亚洲欧美视频播放_欧美日韩综合视频_jiuse九色_亚洲精品成人免费_亚洲精品免费在线_91网在线观看

您現在的位置:首頁 > 技術文章 > 第七章 封閉(Blocking)

第七章 封閉(Blocking)

  • 發布日期:2015-07-14      瀏覽次數:2890
    •    第七章 封閉(Blocking)

         雜交膜上有很多非特異性的蛋白質結合位點,為防止這些位點與抗體結合引起非特異的染色和背景,一般用惰性蛋白質或非離子去污劑封閉膜上的未結合位點來降低抗體的非特異性結合。封閉劑應該封閉所有未結合位點而不替換膜上的靶蛋白、不結合靶蛋白的表位,也不與抗體或檢測試劑有交叉反應。zui常見的封閉劑是 BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠和 Tween-200.05 - 0.1%)稀溶液 PBST 或者 TBST

      5%脫脂奶粉或 BSA(室溫孵育 1 h

      Western Blot 膜封閉液

      Tween-20 的作用:Tween-20 是一種非離子型去污劑,有復性抗原的作用,可提高特異性的識別能力。在做 westen blot 時,用惰性蛋白質或非離子去污劑封閉膜上的未結合位點可以降低抗體的非特異性結合。Tween 這種非離子型去污劑在乳化蛋白時,不破壞蛋白的結構,可減少對蛋白質之間原有的相互作用的破壞。離子型去污劑如 SDS 則破壞蛋白的結構。

      封閉劑選擇的特殊情況:

      脫脂奶粉不能與生物素化或伴刀豆蛋白標記的抗體一起使用,因為脫脂奶粉含有糖蛋白和生物素。如果封閉劑中含磷酸酶,用磷酸化特異性抗體分析磷酸化蛋白受到影響,因為磷酸酶與印記膜上的磷酸化蛋白接觸可使之去磷酸化。檢測磷酸化抗體時,不能使用酪蛋白/脫脂奶粉作為封閉劑。

      一般封閉條件為:

          室溫或者 37℃緩慢搖蕩 12 h,特殊情況也可 4℃封閉一夜。根據結果情況調整封閉試劑的濃度和類型。比如有時 BSA 比脫脂奶粉更有利于降低非特異性背景,而有些抗體則在脫脂奶粉封閉的情況下才能得到清晰的背景。

    主站蜘蛛池模板: 国产精品视频成人 | 美女被按在的视频网站观看 | 日本黄色免费视频 | 8ⅹ8x擦拨擦拨成人免费视频 | 91精品一区二区三区在线 | 在线观看久草 | 久久91亚洲精品中文字幕 | 国产特级毛片aaaaaaa高清 | 日本第一页 | 成年美女黄网色视频免费 | 日本三级黄色片网站 | 狠狠色狠狠人格综合 | www.色播| 日韩久久免费视频 | 欧美亚洲国产精品久久蜜芽 | 亚洲精品suv精品一区二区 | 自拍偷拍亚洲第一页 | 青青草国产免费国产是公开 | 久久不见久久见免费视频7 久久不见久久见免费影院 久久不见久久见免费影院www | 蜜臀av999无码精品国产专区 | 国产精品免费观看久久 | 国产亚洲精品aaaa片app | 91在线亚洲 | 香港曰本韩国三级网站 | 中文无码日韩欧 | 亚洲 自拍 在线 丝袜 | 成人免费在线视频网站 | 国产第一页久久亚洲欧美国产 | 69精品人人人人 | 全日本爽视频在线 | 欧美亚洲理伦电影毛片在线播放 | 四虎影院一区二区 | 国产目拍亚洲精品一区二区三区 | 国内永久第一免费福利视频 | 亚洲国产精品线观看不卡 | 日本久久高清一区二区三区毛片 | 日本三级黄网站 | 亚洲va久久久噜噜噜久久狠狠 | 亚洲男人的天堂视频 | 国产成人精品无缓存在线播放 | 国产手机自拍视频 |